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최근에 들어 분자생물학의 눈부신 발전에 힘입어 많은 질병들의 발생기전 및 관련된 유전자들이 알려져 왔고, 분자생물학의 기법을 이용한
질병의 진단 기법 또한 빠른 속도로 개발되고 있다. 이러한 기법들은 이제 실험실의 연구단계에서 벗어나 임상적 적용이 활발하게
이루어지고 있으며 많은 발전을 가져 왔다. |
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병리과의 업무는 환자의 질환에 대한 정확한 진단을 내릴 수 있도록 고도의 신뢰성을 가진 조직 및 세포병리 검사 결과를 제시하는 것이나,
형태학적 특성에 근거한 병리학적 진단에는 때때로 모호한 진단이 불가피하게 내려질 수 밖에 없었다. 그러한 이유로 질병에 대한 유전자적인
배경을 바탕으로 분자생물학적 기법을 응용한 진단이 이루어지고 있다. 분자병리실에서 현재 검사하고 있는 내용과 검사기간은 다음과 같으며,
각 검사별 사용되는 분자생물학적 기법의 기본원리를 이해하는 것이 중요하다. |
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| 병리 처방 발행 |
| - 병리전문의에 의한 분자병리 Order 발행 |
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| 검사 전처리 |
| - 블록 선별하여 박절, 건조, 탈 파라핀, DNA Extraction(채취) 단계 |
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| 검사 |
| - Denaturation(변성) - Annealing(결합) - Extension(합성)-전기영동 |
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| 결과 보고 및 보관 |
- 분자병리 결과를 EMR로 보고, 결과지 출력
- 결과지 보관 |
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분자병리 검사를 위한 검체는 핵을 지닌 모든 세포가 가능하며 이에 신선 조직, OCT나 paraffin 처리된 조직, Slide상의 조직, 동결 조직, 뇨,
흉수, 복수, 뇌수, 담즙, 환부 추출 가검물, 객담, 배양 세포, 자궁 경부 내막이나 기관지 점막에 대한 찰과 세포, 그리고 유선이나 갑상선 등에 대한
천자 흡인 세포 등이 있다. 검체의뢰 및 취급은 검체 종류에 따라 적절한 취급이 필요하며, 다음의 지침을 참고로 하여 검사결과에 지장을 주지 않도록
처리하도록 한다. |
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Genomic DNA를 이용하는 검사는 적당 기간 동안 검체를 냉장 보관해도 무관하다. RNA를 이용하는 검사는 검체 수거 즉시 핵산 추출을 시행할 수
있도록 하며, 이 경우가 어려울 때는 검체를 -70℃에 얼려두어도 무방하다. 기본적으로 모든 검체는 접수하여 검체를 처리할 때까지 냉장 보관한다. |
| 분류 |
항목 |
비고 |
| PCR |
MTB |
결핵균에 감염여부를 판단하는 검사 |
| HPV DNA chip |
인유두종 바이러스의 감염여부를 판단하는 검사. |
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그밖에 분자병리검사 항목은 수탁검사로 처리하고 있으며 상황에 따라 원내검사항목을 늘려 갈 계획이다.
수탁검사항목은 Q&A에 기술되어있다. |
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| 1) 분자병리 검체 선별, order, 접수, 검사 전처리 |
| ① 분자병리 검체 선별 |
분자병리 검사를 위한 검체는 핵을 지닌 모든 세포가 가능하며 이에 신선 조직, OCT나 paraffin 처리된 조직, Slide상의 조직,
동결 조직, 뇨, 흉수, 복수, 뇌척수액, 담즙, 환부 추출 가검물, 객담, 배양 세포, 자궁 경부 내막이나 기관지 점막에 대한 찰과 세포,
그리고 유선이나 갑상선 등에 대한 천자 흡인 세포 등이 있다. |
| ② 분자병리 order 및 접수 |
㉮ 분자병리 검사 필요시 병리 전문의에 의해 order가 발행된다.
㉯ 의뢰된 검체와 검체 바코드, 검사 의뢰서, 필요시 유전자 검사 동의서를 확인한다.
㉰ 바코드 리더기로 검체 코드를 읽어 접수한다.
㉱ 의뢰서에 병리번호를 붙인다. |
| ③ 검사 전처리 |
㉮ 일반 염색 슬라이드에서 검사가 필요한 부분(예, 악성종양등)에 표시를 한다.
또는 검사가 필요한 세포(예, HPV 의심 하는 환자의 세포)를 채취한다.
㉯ 의뢰된 검체에서 유전자(DNA)를 추출한다.
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| 2) 검사 |
| 검사 항목에 따라 PCR(polymerase chain reaction)을 진행 한다. (예, TB PCR, HPV PCR 등) |
| ① PCR |
㉮ 검사에 필요한 Mgcl2, dNTP, DW, enzyme, primer, template를 이용하여 PCR mixture를 만든다.
㉯ PCR 과정
ⓐ DNA 변성 (denaturation)
ⓑ Primer 결합 (annealing)
ⓒ DNA 합성 (polymerizaton) 또는 신장 (extension)
PCR과정은 각 검사 항목마다 최상의 조건으로 시행한다. |
| ㉰ Electrophoresis |
| 2% agarose gel을 이용하여 PCR 결과를 확인한다. |
| ② HPV genotyping chip |
㉮ HPV genotyping의 경우에만 진행된다.
㉯ HPV genotyping chip 과정
㉰ Oligo probe와 PCR로 증폭된 HPV L1 부위 결합(Hybridization)
㉱ 세척
㉲ DNA chip scanner로 결과 확인(스캔 영상을 HPV 판정표와 비교하여 유전형을 판정) |
| 3) 결과 보고 및 판독 |
| ① 결과보고서 입고 |
| ② 판독 |
| 병리전문의가 판독한다. |
| ③ 결과입력 |
㉮ 전사자는 병리전문의로부터 판독 결과지를 받는다.
㉯ 전사자는 판독 결과지 내용을 병리 OCS에 입력한다.
㉰ 병리전문의가 결과지와 전산상의 결과를 검토하여 오류가 없으면 인증한다.
㉱ 병리전문의가 인증을 하면 EMR상으로 결과가 기재된다. |
| ④ 결과조회 |
| OCS의 결과조회 화면과 EMR의 병리검사 결과조회 화면에서 조회가 가능하다. |
| 4) 보관 |
| 추출된 유전자는 유전자 검사 의뢰 동의서에 작성에 의한 기준에 따른다. (예, 5년) |
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| Fume Hood |
PCR의 준비 과정을 행하는 곳으로 오염을
방지하기 위해 외부와의 접촉을 피해야
하기 때문에 사용한다 |
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| Microcentrifuge |
분자병리검사과정 중, 시약 및
DNA를 원심분리 할 때 사용한다. |
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| PCR machine |
최적의 온도를 이용하여 DNA변성 ->Primer결합
조건을 설정하여 사용한다. |
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| Electrophoresis |
증폭된 DNA를 이용하여 전기영동 실시 후
병원체유전자 유무를 판단하는데 사용한다.
결과는 필름으로 인쇄가 가능하다. |
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| Chip scanner |
형광물질과 DNA가 결합하는 것을 이용하여
스캔하는 장비로 HPV genotyping 검사시
사용하는 장비이다. |
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